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關於兄弟失和的原因，魯迅與周作人生前從未對人提及。魯迅從未在文章中提及失和之事，而周作人一再表示“不辯解”，他在《知堂回想錄·不辯解說（上）》裡說：“大凡要說明我的不錯，勢必先說對方的錯。不然也總要舉出些隱秘的事來作材料，這都是不容易說得好，或者不大想說的，那麼即使辯解得有效，但是說了這些寒傖話，也就夠好笑，豈不是前門驅虎而後門進了狼嗎？”
關於周氏兄弟失和之事，流傳有各種猜疑，有的說是魯迅偷看羽太信子洗澡被發現；有人說是魯迅趁周作人不在，調戲弟媳，遭到羽太信子的拒絕後，兄弟失和；也有人以弗洛伊德的性心理學說來套魯迅，說他本來對羽太信子就垂涎已久，性壓抑得不到釋放，試圖勾引弟媳被拒後，便惱羞成怒，與周作人夫婦打了一架後離開了八道灣；更有人說羽太信子原為魯迅的戀人，後被周作人奪愛；通說認為，周氏兄弟因為文化上的觀點不同，再加上羽太信子的從中挑撥，造成兄弟失和。但無論哪種說法，有一點是肯定的，就是周氏兄弟的斷交，是因為家庭矛盾，與羽太信子脫不了干係。
1964年，周作人在寫給香港友人鮑耀明的信中說，趙聰的《五四文壇點滴》中“關於我與魯迅的問題，亦去事實不遠，因為我當初寫字條給他，原是隻請他不再進我們的院子裡就是了。”趙聰的《五四文壇點滴》中有關周氏兄弟失和的文字，除引證魯迅日記中有關兄弟失和的記載外，也僅有如下幾句：“許壽裳說過，他們兄弟不和，壞在周作人那位日本太太身上，據說她很討厭她這位大伯哥，不願同他一道住。如此推斷，周氏兄弟失和的原因是羽太信子不願同魯迅一道住。”
魯迅的好友許壽裳在《亡友魯迅印象記》中說：“作人的妻羽太信子是有歇斯底里性的。她對於魯迅，外貌恭順，內懷忮忌。作人則心地胡塗，輕信婦人之言，不加體察。我雖竭力解釋開導，竟無效果，致魯迅不得已移居外客廳而他總不覺悟。魯迅遣工役傳言來談，他又不出來；於是魯迅又搬出而至磚塔衚衕。從此兩人不和，成為參商，一變從前‘兄弟怡怡’的情態。”
郁達夫在《回憶魯迅》中說：“據（張）鳳舉他們的判斷，以為他們兄弟間的不睦，完全是兩人的誤解，周作人氏的那位日本夫人，甚至說魯迅對她有失敬之處。但魯迅有時候對我說：‘我對啟明，總老規勸他的，教他用錢應該節省一點，我們不得不想想將來。他對於經濟，總是進一個花一個的，尤其是他那位夫人。’從這些地方，會合起來，大約他們反目的真因，也可以猜度到一二成了。”
周建人也認為兩位兄長失和的原因是家庭矛盾，因為周作人妻子的肆意揮霍。周建人說，當時魯迅在教育部的薪金每月三百元，還有稿費、講課費等收入，周作人也差不多。兩人的收入已經很高，但家中卻月月虧空。原因在於當家的周作人太太羽太信子揮金如土。家中僱有許多僕傭，有紹興家中的老僕人王照鶴、管家、燒飯司務、東洋車伕、打雜採購的男僕人，還有收拾房間、洗衣、看孩子的女僕二三人。即使周氏兄弟的祖父在前清做京官，也沒有這麼多的男女傭工。信子經常心血來潮，花樣百出，有時飯做好了，忽然想起要吃餃子，就把一桌飯菜退回廚房——廚房裡趕緊另包餃子；被褥用了一、兩年就不要了，賞給男女傭人，全部換成新的。魯迅不僅每月收入交公，多年積蓄也賠了進去，有時還到處借貸，自己則窮得夜裡寫文章時沒錢買香菸和點心。魯迅到上海後，曾對周建人講起八道灣的生活，說：“我已經涓滴歸公了，可是他們還不滿足。”
周建人還提到，一次，周作人說要把岳父母接到中國來同住，魯迅很不贊成，認為多年來寄錢供養他們，已經情至義盡了，今後可以繼續養老送終；他們還有別的子女在日本，就不必接到中國來了。
